最近，新冠病毒檢測(cè)假陰性問題討論度頗高。核酸檢測(cè)一直被認(rèn)為是感染性疾病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。通常，核酸檢測(cè)試劑盒的準(zhǔn)確度可達(dá)95%以上。為什么新冠病毒呼吸道的假陰性率高呢？這其中包含了很多方面的原因，比如試劑盒的檢測(cè)限、采集標(biāo)本的質(zhì)量、標(biāo)本保存運(yùn)送情況、檢測(cè)實(shí)驗(yàn)操作、結(jié)果判讀等很多方面。

其中采集標(biāo)本的質(zhì)量是非常重要的因素。拭子上病毒的量越多，就越容易檢測(cè)出來。相反，拭子上病毒的量太少，就可能出現(xiàn)假陰性的情況。影響拭子上病毒量的因素主要有兩個(gè)。

不同的病程，不同部位，可采集到的病毒量都有很大差別。根據(jù)《新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南》，呼吸道檢測(cè)樣本的類型有上呼吸道標(biāo)本（咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物），下呼吸標(biāo)本（深咳痰液、呼吸道抽取物、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液、肺組織活檢標(biāo)本）。新冠病毒主要感染下呼吸道及肺部，下呼吸道采集優(yōu)于上呼吸道采集，病毒多，最易檢出。但采集越深部的樣本，對(duì)患者的創(chuàng)傷越大。

尤其對(duì)于上呼吸道標(biāo)本，病毒載量本來就比較低，如果采集操作不規(guī)范，便會(huì)導(dǎo)致實(shí)際上采到的拭子上的病毒量更少。由于采集技術(shù)不過關(guān)，而出現(xiàn)檢測(cè)的假陰性，在呼吸道檢測(cè)中屢見不鮮。

雖然下呼吸道標(biāo)本更優(yōu)，但咽拭子采集速度快，采集容易，創(chuàng)傷更小，對(duì)于患者和標(biāo)本采集人員都更為方便。因此上呼吸道標(biāo)本占了相當(dāng)高的比例。如果能夠提高上呼吸道采樣技術(shù)能力，從而降低假陰性率，這將非常有意義。以下是口咽拭子和鼻咽拭子采集的方法和注意事項(xiàng)。

1. 準(zhǔn)備清水，讓患者漱口（不能漱口者少量飲水并咽下）；

2. 取出咽拭子，讓患者頭部微仰，嘴張大，發(fā)“啊”音，露出兩側(cè)咽扁桃體。

3. 手持拭子在患者兩側(cè)咽扁桃體以及咽后壁各旋轉(zhuǎn)拭抹3~5次。

4. 迅速將拭子采集端浸入保存液中，拭子沿?cái)帱c(diǎn)折斷，棄去尾部。

5. 旋緊管蓋，輕輕搖晃，并用封口膜封閉管蓋。

6. 按照試劑盒說明的環(huán)境條件進(jìn)行保存，并及時(shí)送檢。

1.標(biāo)本采集管先貼好條形碼，盡可能采集患者發(fā)病3d以內(nèi)的口咽拭子標(biāo)本。

2.為減少暴露風(fēng)險(xiǎn)，采集人員應(yīng)加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)。

3.在操作前應(yīng)向患者及家屬做好解釋工作。

4.拭子必須充分接觸兩側(cè)咽扁桃體和咽后壁。

5.采集時(shí)，拭子應(yīng)在兩側(cè)扁桃體和咽后壁上充分旋轉(zhuǎn)，旋轉(zhuǎn)的力度應(yīng)把握好。

1. 清除鼻腔前端的分泌物（如必要）；

2. 以拭子測(cè)量鼻尖到耳垂的距離，并用手指做標(biāo)記。

3. 將拭子以垂直鼻子（面部）方向插入鼻腔，從下鼻道深入抵達(dá)鼻咽后壁，直到標(biāo)記位置或觸壁遇阻。（拭子深入距離最少應(yīng)達(dá)耳垂部位到鼻尖長(zhǎng)度的一半）。

4. 使拭子在鼻內(nèi)停留15~30s，輕輕旋轉(zhuǎn)3~5次。

5. 迅速將拭子采集端浸入保存液中，拭子沿?cái)帱c(diǎn)折斷，棄去尾部。

6. 旋緊管蓋，輕輕搖晃，并用封口膜封閉管蓋。

7. 按照試劑盒說明的環(huán)境條件進(jìn)行保存，并及時(shí)送檢。

1. 標(biāo)本采集管先貼好條形碼，盡可能采集患者發(fā)病3d以內(nèi)的鼻咽拭子標(biāo)本。

2. 為減少暴露風(fēng)險(xiǎn)，采集人員應(yīng)加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)，并可選擇側(cè)位站立。

3. 采集時(shí)，拭子應(yīng)朝垂直鼻子（面部）方向，而不是頭頂方向伸入。

4. 采集時(shí)，拭子應(yīng)在鼻粘膜上充分旋轉(zhuǎn)，旋轉(zhuǎn)的力度應(yīng)把握好。

除了標(biāo)本采集，標(biāo)本的保存和運(yùn)送過程也很關(guān)鍵，采集的拭子應(yīng)盡量放在保存液中。有些情況下實(shí)驗(yàn)室會(huì)用生理鹽水代替保存液，這點(diǎn)不建議。因?yàn)楸４嬉褐幸话銜?huì)有蛋白變性劑和核酸酶抑制成分，蛋白變性劑可使病毒失活并釋放其核酸，核酸酶抑制成分可維持標(biāo)本的穩(wěn)定性，使核酸不易發(fā)生降解。而生理鹽水就沒有這些功能了。

標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送檢。如不能馬上檢測(cè)，那么標(biāo)本需要在合適的溫度（具體參照說明書）下進(jìn)行保存，以防止RNA降解。如果標(biāo)本送檢人員不了解RNA極易降解的特性，很可能發(fā)生送檢不及時(shí)、保存溫度不當(dāng)而使核酸發(fā)生降解的情況。此時(shí)，無論使用多么精準(zhǔn)的檢測(cè)試劑盒都可能報(bào)出假陰性的檢測(cè)結(jié)果。

另外一點(diǎn)就是提取前的滅活處理。為了減小檢測(cè)人員的職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn)，最好是將病毒先進(jìn)行滅活，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。目前很多實(shí)驗(yàn)室采用高溫滅活的方式，這個(gè)高溫滅活過程可能會(huì)降低檢測(cè)的陽性率。建議使用有滅活功能的拭子保存液，省卻高溫滅活的環(huán)節(jié)。

最后，分子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室在核酸提取、擴(kuò)增等步驟都要遵循標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程，才能得到更準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，為臨床和患者出具可信的報(bào)告。