以2019-nCoV新型冠狀病毒的高度特異性序列為靶區(qū)域，設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過多重?zé)晒釶CR擴(kuò)增，實(shí)現(xiàn)對(duì)2019-nCoV新型冠狀病毒RNA的檢測(cè)。這種方法也是目前新冠病毒檢測(cè)試劑盒中最常用的檢測(cè)方法。靈敏度及特異性都很高，檢測(cè)時(shí)間在2h左右。同時(shí)，這種方法對(duì)樣本采集以及檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室規(guī)范要求很高。若樣本采集不到位，標(biāo)本所帶病毒量較少；實(shí)驗(yàn)操作失誤，造成病毒RNA降解，易造成檢測(cè)出現(xiàn)“假陰性”。為解決此問題，可在試劑盒中加入內(nèi)源性內(nèi)參的引物探針，用內(nèi)源性內(nèi)參的結(jié)果來質(zhì)控標(biāo)本采集提取及實(shí)驗(yàn)操作流程是否無誤。

以2019-nCoV新型冠狀病毒的高度特異性序列為靶區(qū)域，設(shè)計(jì)特異性逆轉(zhuǎn)錄引物及擴(kuò)增引物，進(jìn)行普通PCR擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物采用Sanger測(cè)序儀的片段分析功能進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)在目標(biāo)片段長(zhǎng)度位置是否出現(xiàn)檢測(cè)峰為依據(jù)進(jìn)行結(jié)果判斷。此方法可根據(jù)不同待檢病毒靶標(biāo)設(shè)計(jì)不同目標(biāo)長(zhǎng)度的產(chǎn)物，進(jìn)行多靶標(biāo)檢測(cè)，進(jìn)而區(qū)分患者感染的是哪種冠狀病毒，做到冠狀病毒的分型檢測(cè)。

高通量測(cè)序技術(shù)通過對(duì)待測(cè)目標(biāo)的文庫構(gòu)建，測(cè)序，序列拼接比對(duì)獲得待測(cè)目標(biāo)基因組序列的全貌。對(duì)在此次武漢疫情爆發(fā)初期，通過構(gòu)建宏基因組文庫進(jìn)行NGS測(cè)序鑒定出新型冠狀病毒，并成功繪制出其全基因組序列信息。迅速判斷出此次爆發(fā)的冠狀病毒為一種新的冠狀病毒，與SARS病毒序列高度相似。正是有了新冠病毒全基因組信息，才能使國(guó)內(nèi)科學(xué)家及診斷企業(yè)研發(fā)熒光定量試劑盒用于新冠病毒的檢測(cè)。目前，到了疫情攻堅(jiān)戰(zhàn)的此刻，新冠病毒溯源、流行、變異規(guī)律、變異監(jiān)測(cè)、分子流行病學(xué)、人類感染的發(fā)病機(jī)理等尚待進(jìn)一步明確。

這時(shí)，NGS技術(shù)在解析病毒變異情況和追蹤病毒起源及演化方面，扮演著不可替代的核心作用。

此次2019-nCoV病毒為RNA病毒，在傳播過程存在發(fā)生變異的可能性，并在一定程度上將影響RT-PCR的敏感性，采用高通量測(cè)序方法則可解決這一問題，并監(jiān)測(cè)到可能的病毒變異。部分病毒含量較低的樣本，在低于RT-PCR最低檢出限時(shí)，采用高通量測(cè)序方法則可以提高陽性檢出率，避免漏檢和錯(cuò)檢；對(duì)于疑似感染、多重感染或繼發(fā)感染病原，采用高通量測(cè)序方法則可進(jìn)行并發(fā)檢測(cè)，提供更多可能感染的病原信息。

總之，從測(cè)定未知病原，到鑒定已知序列，再到陽性樣本的結(jié)果確認(rèn)以及可能存在的序列變異動(dòng)態(tài)監(jiān)控，都可以采用NGS方法有效應(yīng)對(duì)。但NGS方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室及實(shí)驗(yàn)人員操作要求是這幾個(gè)檢測(cè)方法中最高的。

抗體是機(jī)體感染病毒后，體液免疫應(yīng)答的產(chǎn)物。通常，免疫球蛋白M(IgM)抗體在感染早期出現(xiàn),免疫球蛋白G(IgG)抗體在感染中晚期出現(xiàn)。通過血清學(xué)檢測(cè)，利用抗原抗體的特異性結(jié)合原理，配合標(biāo)記物顯色篩查，實(shí)現(xiàn)對(duì)人體血清、血漿或全血中新型冠狀病毒IgM/IgG抗體的體外定性檢測(cè)。

簡(jiǎn)言之，檢測(cè)特異抗體也可以明確患者是否“近期或既往感染過新型冠狀病毒”，有助于核酸檢測(cè)陰性但臨床上疑似患者的確診。其主要優(yōu)點(diǎn)在于現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)診斷，不要任何檢測(cè)設(shè)備，具備快速、便捷、高效檢測(cè)的特點(diǎn)，可用于社區(qū)基層醫(yī)院甚至家庭的早期初步篩查。

另一方面，核酸檢測(cè)多采用上呼吸道樣本（咽拭子為主），采集過程對(duì)于醫(yī)護(hù)人員暴露風(fēng)險(xiǎn)極大，而抗體檢測(cè)是通過血液樣本檢測(cè)，感染風(fēng)險(xiǎn)降低。但抗體檢測(cè)容易受到血液標(biāo)本中的一些干擾物質(zhì)（如非特異IgM、類風(fēng)濕因子、溶血所致的高濃度度血紅蛋白等）的存在而出現(xiàn)“假陽性”結(jié)果，所以抗體檢測(cè)必須采用IgM 和IgG同時(shí)檢測(cè)且通常需多次動(dòng)態(tài)檢測(cè)來確認(rèn)。

因此，特異抗體檢測(cè)陽性不能像病毒核酸檢測(cè)陽性一樣作為病毒感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”。